一、生化反应原理（PCR 扩增原理）

通过重复变性?退火?延伸三步温度循环，完成核酸扩增。

1. 变性（94?98℃）：高温打断 DNA 双链氢键，双链解旋，变成两条单链模板。
2. 退火（50?65℃）：快速降温，引物与单链模板特异性碱基互补结合。梯度机型可模块不同位置设置不同退火温度，一次实验筛选最优退火条件。
3. 延伸（72℃）：耐热 Taq DNA 聚合酶以 dNTP 为原料，从引物 3’端合成新 DNA 链。

每完成 1 个循环，目标 DNA 拷贝数理论翻倍；25?40 轮循环后微量模板得到百万级扩增。

普通 PCR 仪只做扩增；荧光定量 qPCR（Accurate 系列）增加光学检测单元，每循环采集荧光信号，实时监测产物增量，实现定量分析大龙兴创实...。

二、仪器硬件工作原理（大龙核心技术）

1. 帕尔贴半导体温控（Peltier） 通电改变电流方向，实现模块快速加热 / 制冷；配合 PID 闭环温控，实现快速升降温；大龙机型带边缘温度补偿技术，消除孔位边缘效应，保证整板温度均一性＜0.3℃。
2. 热盖加热 热盖温度高于反应液温度，防止 PCR 管内水汽冷凝到管盖，避免反应体系体积浓缩、干管。
3. 梯度功能（梯度 PCR 型号） 金属模块横向分区控温，同一板上同时产生 1?42℃跨度的梯度温度，用于退火温度条件摸索。
4. 荧光定量机型额外光学系统（Accurate 系列） 免维护 LED 光源激发，MPPC 光电检测器采集荧光，多通道检测，读取每孔荧光强度，输出 Ct 值、扩增曲线，完成定量、熔解曲线分析大龙兴创实...。

三、整机工作流程

1. 将 PCR 反应体系加入 PCR 管 / 八联管 / 96 孔板，放置金属模块；
2. 设置程序：预变性→（变性?退火?延伸）循环→终延伸→4℃保温保存；
3. 仪器帕尔贴模块按照程序自动切换温度，热盖同步开启；
4. 普通 PCR：运行结束后取出产物，电泳检测；
5. qPCR 荧光定量：扩增过程同步采集荧光，软件直接输出结果。

四、关键原理衍生的使用要点

1. 温度均一性直接决定孔间扩增重复性；模块不能磕碰，保证管子和模块良好贴合。
2. 热盖压力要合适，压力过低会冷凝蒸发；压力过大容易压坏 PCR 管。
3. 帕尔贴模块禁止骤冷骤热暴力操作，定期模块清洁，无腐蚀性试剂残留。
4. 梯度 PCR：梯度设置只改变退火步骤，其他步骤温度全模块统一。